Versuchsdurchführung: Trypanblaufärbung zum qualitativen Nachweis von Endomykorrhiza an Juglans regia L.

1. Bodengewinnung
Montag, den 10.12.07

Mit Hilfe eines Spatens wurden einige Seitenwurzeln von einem circa 3 jährigen wilden Aufwuchs, im Pflanzengeographischen Arboretum (Nordamerika) des Forstbotanischen Gartens der Universität Göttingen entnommen.
Die Proben wurden in einer Plastiktüte verstaut und im Kühlraum über Nacht gelagert.

2. Waschen
Dienstag, den 11.12.07

Das Wurzelmaterial wurde in einer mit reichlich Leitungswasser gefüllten Plastikschüssel vorsichtig gereinigt. Danach wurde es mit einem Analysesieb vom Waschwasser getrennt und in eine mit nassen Tüchern befeuchteten Schüssel gelegt.

3. Trypanblaufärbung nach einer Methode von Koske und Gemma (1989)
Dienstag, den 11.12.07 und Mittwoch, den 12.12.07

Zunächst wurden die Seitenwurzeln für 60 min bei 90 °C in 2,5% KOH in einem Wasserbad entfärbt. Anschließend wurde das KOH entnommen und die Wurzelproben dreimal mit H2O bidest gewaschen.
Als nächster Schritt folgte die 30-minütige Inkubation in einer Lösung aus 2,5 ml H2O2 30%, 2 ml NH4OH 25% und 20,5 ml H2O bidest bei Raumtemperatur. Nach Ablauf der Zeit wurden die Proben erneut dreimal mit H2O bidest gewaschen und über Nacht in einprozentigem HCL inkubiert.
Am nächsten Morgen wurden die Wurzeln für 60 min bei 90 °C in eine Lösung aus 0,05% Trypanblau (in 50 ml Glycerin, 45 ml H2O und 1% HCL) gelegt. Danach folgte eine Entfärbung für weitere 60 min bei 60 °C in einer saueren Glycerinlösung bestehend aus 25 ml Glycerin, 22,5 ml H2O und 2,5 ml HCL 1%.
Von den so behandelten Wurzeln wurden Quetschpräparate hergestellt und diese unter dem Mikroskop (Axioplan, Zeiss, Oberkocken, Germany) betrachtet, um Vesikel und Arbuskel sichtbar zu machen. Abschließend wurden Mirkofotografien mit einer Digitalkamera (Zeiss Axiocam MRc) und der Software Axiovision (Zeiss) angefertigt.